Protocolo para Ziehl-Neelsen

Tinción de Ziehl-Neelsen

Esta técnica es usada para la determinación de unas bacterias que son resistentes al alcohol ácido, como puede ser la bacteria de la tuberculosis (Mycrobacterium tuberculosis).  Estas bacterias tienenuna pared característica que les proporciona dicha resistencia. El protocolo siguiente es una variante llamda Tinción de Kinyoun o "en frío", por lo que hay distintos protocolos para este tipo de muestras.

Protocolo

La muestra la comenzamos desde el xilol, se dejan sumergidas en el xilol 20 minutos como mínimo, aunque lo habitual son dos baños de 20 minutos cada uno para quitar los restos de parafina.

·         Hidratación en alcoholes decrecientes para preparar al tejido cuando le vayamos a poner el colorante hidrofílico. Para ello estarán en los alcoholes 100º, 96º, 80, 70, 50º, 5 minutos, terminando en el agua destilada también 5 minutos.

·         Posteriormente lo tratamos con la ferrol fucsina durante 30 minutos, la ferrofucsina se prepara de la siguiente forma:

o   Fucsina básica 0,3 gramos

o   Alcohol 96º 10ml

o   Solución acuosa de fenol al 5 %, 90ml

·         Lavado de agua, preferiblemente de agua destilada

·         Decolorar con alcohol-ácido, el tiempo para este paso depende del tejido del que estemos tratando, por lo que tendremos que tener cuidado en este punto.

o   97ml de alcohol 96º

o   3ml de ácido clorhídrico

Las bacterias y otras estructuras que sean resistentes al alcohol ácido serás las que permanecer con el color mientras que el resto del tejido se decolora y se teñirá con otro colorante de contraste.

·         Lavar con agua corriente durante 8 minutos, con la finalidad de parar la acidez que se le proporcionó en el paso anterior.

·         El colorante de contraste en este caso se utilizará el azul de metileno, pero se puede contrastar con otro colorante que proporcione un color diferente al primero y que se ajuste a las características del ensayo.

o   Por lo que en el azul de metileno estará 30 minutos

§  0,3 gramos del colorante

§  100 ml de agua destilada

·         Después del contraste se lava en agua corriente y a continuación con agua destilada.

·         Finalmente se procede a realizar la deshidratación en alcoholes crecientes terminando en el xilol, en cada uno de los alcoholes tendrá que estar de 2-5 minutos, al igual que en el xilol.

El resultado para esta tinción es:

-          Las bacterias y estructuras alcohol-ácido resistente serán de color rojo

-          El resto del tejido o fondo será de color azul. 

Fig 1. Resultado de la técnica donde se presentan las bacterias alcohol-ácidas resistentes, foto extraída de Wikipedia. 

Referencias
- Foto de Wikipedia que la podéis encontrar junto a más información en: https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl-Neelsen