Tinción Hematoxilina-Eosina

Introducción

De todas las tinciones de las que se puede realizar es sin duda la tinción de hematoxilina-eosina la más común en histología. Es una coloración de tipo topográfica ya que da una visión del conjunto de las estructuras del tejido.

Esta tinción está compuesta por dos colorantes: la hematoxilina, que es un colorante nuclear por lo que tiene un carácter acidófilo, y el otro colorante es la eosina, este colorante es citoplasmático o en otras palabras basófilo. 

La afinidad de un colorante por una determinada estructura es el radical del auxocromo, según dicho radical podrán ser ácidos, básicos, neutros y/o indiferentes. Como hemos dicho anteriormente, la hematoxilina se une al núcleo (estructura ácida) por lo que este colorante será básico. La eosina en cambio se une a estructuras básicas (como las proteínas que hay en el citoplasma) por lo que este colorante será ácido. 

Hematoxilina 

Primero hay que destacar que la hematoxilina no es el verdadero colorante sino el producto de la oxidación de éste, llamado hemateína. 

Además requieren de un mordiente, el alumbre potásico o amónico denominado hemalumbre

• hematoxilina de Harris alumbre potásico
• hematoxilina de Mayer alumbre amónico
• hematoxilina de Weigert alumbre férrico
• hematoxilina de Carazzi alumbre potásico
• entre otras.

Cada una de las hematoxilina nos será útil para una determinada tinción.

Produce un color azul negruzco.

Eosina

Es un derivado xanténico. Hay dos tipos de eosinas, atendiendo a su composición:

• Eosina Y con 4 átomos de Br
• Eosina B con 2 átomso de Br

Se pueden usar en solución acuosa o alcohólica dependiendo de la tinción.

Produce un color rojo.

Procedimiento

• Los cortes a teñir han de estar desparafinados, para ello se hacen baños en xilol 20 minutos
• Hidratación de los cortes:
• Alcohol 100º durante 2-5 minutos
• Alcohol 100º durante 2-5 minutos
• Alcohol 95º durante 2-5 minutos
• Alcohol 95º durante 2-5 minutos
• Agua corriente 2-5 minutos
• Hematoxilina de Harris durante 10 minutos. Si se utiliza este tipo de hematoxilina se aconseja diferenciar.
• Lavar con agua corriente hasta que el tejido deje de soltar colorante.
• Diferenciación:  con una solución alcohol-ácida 1% hasta que veamos necesario, suelen ser unas pocas pasadas dependiendo del tipo de muestra.
• Agua amoniacal 2% unos pocos segundos, para estabilizar la hematoxilina, además produce un azuleado. 
• Lavado con agua corriente
• Eosina alcohólica 3 minutos, al ser alcohólica en los alcoholes se nos diferenciará un poco.
• Deshidratación, para preparar la muestra antes de introducirla en el xilol.
• Alcohol 95º durante 2-5 minutos
• Alcohol 95º durante 2-5 minutos
• Alcohol 100º durante 2-5 minutos
• Alcohol 100º durante 2-5 minutos
• Xilol y montar el portaobjetos con nuestro medio de montaje como puede ser el DPX o Entellan

Resultados

Núcleos azules oscuros

Citoplasmas rosa

Fibras musculares y hematies rojos

Fig 1. Glomérulo de un riñón teñido con hematoxilina eosina