Por el bien de difundir los conocimientos y viendo que, a la hora de aclarar mis dudas sobre la técnica, en Internet no hay nada claro por lo que os dejo el protocolo que he realizado para tejido nervioso. Antes de comenzar, por lo que he visto por Internet, dependiendo del animal del que proceda el tejido las concentraciones de los reactivos pueden variar.
Para empezar se comienza con una hidratación en alcoholes decrecientes durante 5 minutos en cada uno de ellos.
- 96º
- 80º
- 70
- 50
Terminando en dos baños de agua destilada durante 5 minutos cada uno de ellos.
Posteriormente se introduce en el mordiente
- Ferric ammonium sulfate (FAS) al 2,5% durante 45 minutos
Después de este paso lo tendríamos que lavar con agua destilada un tiempo para quitar el exceso del mordiente.
Tras el lavado lo introducimos en la solución del colorante, que en nuestro caso es la hematoxilina de Heidenhain 10% y carbonato de litio al 1%
- La hematoxilina de Heidenhain se encuentra en una solución alcohólica, por lo que se realizará tres días antes al uso, con 5g de la Htx de Heidenhain y 50ml de alcohol absoluto mantenido en agitación.
Una vez terminada la Htx, con sus tres días en reposo (sin agitación), se procede a realizar la solución que se va a utilizar, siendo los porcentajes citados anteriormente. Las preparaciones se mantienen en esta solución durante 1h o 2h.
Es importante destacar que la concentración del cloruro de litio hará que la tinción esté más o menos teñida. A mayor concentración de cloruro de litio menos teñido se tendrá el tejido.
Al acabar con la Htx, se lava en agua destilada para retirar el exceso de Htx.
Finalmente para poder montar las preparación se deshidratan en alcoholes crecientes durante 5 minutos
- 80º
- 96º
- 100º
- xilol
El resultado macroscópico esperado, variando las concentraciones de Htx y del Cloruro de litio es este:
